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香豆素

  自然产品钻研与开采Nat 著作编号:1001-6880(2010}03-0485-05 Prod Res Dev 2010,22:485-489 白芷中四种线型呋喃香豆素类因素药理影响钻研 王梦月1’2,贾敏如h,马逾英1,李晓波2 1成都中医药大学药学院,成都610075;2上海交通大学药学院,上海200240 摘要:钻研了白芷中异欧前胡素、欧前胡素、水合氧化前胡素、白当归素等4种苛重线型呋喃香豆素类因素的 药理影响。不同采用热板法、醋酸扭体法参观镇痛活性;家兔离体回肠法参观解痉活性;MIT法参观抗肿瘤活 性。出现异欧前胡素、欧前胡素具有明白的镇痛影响,能明白禁止热板、醋酸所致小鼠疾苦,为白芷镇痛的活性 因素;异欧前胡素、欧前胡素、水合氧化前胡素均能明白缓解BaCl,所致兔肠滑腻肌痉挛,为白芷解痉的活性成 分;异欧前胡素、水合氧化前胡素具有明显抗肿瘤影响,对HL-60、P388、HELA、A549等细胞株的孕育均有明白 禁止影响。 要害词:白芷;欧前胡素;异欧前胡素;水合氧化前胡素;白当归素;镇痛;解痉;抗肿瘤 中图分类号:R285.5 文献标识码:A Pharmacological Effect of Four Linear Furocoumarins in Radix AngeHcae dahuricae WANG Meng.yuel?2,JIA Min.1"111’,MA Yu.yin91,LI Xiao—b02 1School ofPharmacy,Chengdu Univers豇y矿Traditional Chinese Medici鹏,Chengdu 610075,China; 2School酽Pharmacy,Shanghai Jiao Abstract:Four main Hnear furoeourmarins in and oxypeucedanin hydrate were Tong Univers灯,Shanghai 20D24D,China Rad/s Angelicae dahuricae,i.e,isoimperatorin,imperatorln,byakangelicin extracted and purified by silica?gel column chromatograph.Their analgestic effects were on evaluate by decreasing the mice’B pain caused by hot board and ace石c acid.Their spasmolysis actions Were carried i- solated rabbit intestine and anti?tulnor activities were screened by MTr,respectively.The results showed that isoimpem- torin and imperatorin had obviously analgestic tic acti嘶and they repressed the mice’S pain caused by hot board and ac争 acid.Isoimperatofin.impemtofin and oxypeucedanin hydrate had distinctly spasmolytic effect and significantly静 had no pressed the smooth muscle spasm of rabbit’S isolate intestine caused by effect.Isoimperatofin and oxypeucedanin hydrate had obviously BaCh,while byakangelicin anti-ttmaor effect. obvious Key words:Angelica dahurica;isoimperatofin;impemtorin;byakangelicin;oxypeucedanln hydrate;analgesic effect;spas- molysis;anti-tumor 白芷为一常用中药,用于鼻渊头痛、风湿痹痛等 病的诊疗,疗效的确。白芷的苛重化学因素为香豆 素,咱们前期钻研初度出现白芷总香豆素具有明白 的镇痛妥协痉影响,能明白抗拒热板、冰醋酸所致小 鼠疾苦及BaCl2所致兔肠滑腻肌痉挛…;秦旭华、 Okuyama in,2)、白当归素(byakangelicin,3)、水合氧化前胡素 (oxypeucedanin hydrate,4)等线)。为进一步研商自芷镇痛、解痉、抗肿瘤的活性成 CH3 C卜b T等也报道白芷总香豆素具有明白的镇痛 影响【2】、抗肿瘤影响[3】。但白芷镇痛、解痉、抗肿瘤 的活性因素尚不清爽。白芷的苛重香豆素类因素为 异欧前胡素(isoimperatorin,1)、欧前胡素(imperator- 哗 4 o K 妣砒 收稿日期:2009-07-20 担当日期:2009-09-09 基金项目:四川省科技厅项目(川科农2001[22]号) ?通信作家Tel:86-28-87783201:E.mail:JMRl934@126.砌n 图1 Fig.1 4种呋喃香豆素组织式 structure The of four furocourmarins 万方数据 自然产品钻研与开采 分,从而为白芷的质料左右供给科学按照,咱们对上 述4种呋喃香豆素举行了镇痛、解痉、抗肿瘤尝试, 本文报道钻研结果。 1 1.1 IC5D的盘算推算。 2.2药理供试样品的制备 杭白芷根30 kg,碎裂成粗粉,150 L乙醇回流提 尝试资料 尝试药材 取3次,接受乙醇得醇浸膏1334 g。醇浸膏悬浮于 水,石油醚(30-60℃)萃取,弃去石油醚片面;不断 以醋酸乙酯萃取,接受溶剂得总香豆素477 g。取总 香豆素200 g,行硅胶柱层析,石油醚洗脱,弃去洗脱 流份;继用石油醚一醋酸乙酯(95:5、80:20、60:40、 40:60)洗脱,不同得异欧前胡素1250 mg、欧前胡素 2345 2002年7月采于四川省遂宁市川白芷GAP基 地,经成都中医药大学药学院贾敏如熏陶判决为杭 白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)BentlI.et (Boisa.)Shah et Yuan的干燥 Hook.f.V81".formo, 根,凭证标本留存于成都中医药大学药学院。根晒 干备用。 1.2细胞株 mg、白当归素1850 nag、水合氧化前胡素3680 NMR、”C mg。上述因素均经1H 法确定组织。 NMR、EI—MS等方 4种香豆素均到场l%的吐温-80心理盐水溶 液,超声融化,配成0.5%的溶液供镇痛、解痉尝试; 用DMSO配制成所40、10、2.5、0.625、0.156 I山g/mL 人自血病细胞株HL-60。人肝癌细胞株BEL. 7402,小鼠白血病细胞株P388、LHl210,人宫颈癌细 胞株HELA,人肺癌细胞株A-549均由邦度新药筛 选中央供给。 1.3尝试动物 供抗肿瘤尝试。 2.3镇痛尝试 2.3.1醋酸扭体法 昆明种小鼠:明净级,体重20±2 g,由成都中医 药大学医学尝试动物中央供给[动物及格证:川实 动管2003(6)号];新西兰兔:明净级,体重2.O一 2.5 100只小鼠(牝牡参半)j随机分为lO组,每组 10只。阴性比照组腹腔打针lO g/kg(体重)的l% 吐温80心理盐水溶液,其余组按外1剂量腹腔打针 给药。30 min后腹腔打针0.6%醋酸溶液O.2 20 mL/ kg,由中邦医学科学院输血钻研所供给(动物合 格证:川实动管99-11号)。 1.4药物、试剂及耗材 硫酸罗通定打针液(广东博罗前卫药业集团有 限公司,批号:020408,利用前用心理盐水配成4 mg/mL备用),二甲基亚砜(DMSO,常州市科丰化学 试剂厂),3.(4,5.二甲基-2-噻唑)-2,5.二苯基溴化 四唑(MTr,美邦AMRECO公司),RPMll640提拔基 (美邦GibicoBRL公司),胎牛血清(杭州四时青生 物工程资料有限公司),乙酰胆碱(广州化学试剂公 司),氯化钡(Sigma公司),台氏液(鲜嫩配制)。其 余化学试剂均为剖判纯。 1.5苛重仪器 只。参观并记载打针醋酸溶液后的扭体埋伏期及 min内呈现扭体反响的次数。尝试完毕,按下式 盘算推算药物镇痛百分率:镇痛率=(比照组扭体次数- 给药组扭体次数)/比照组扭体次数×100%【5】。 2.3.2热板法 采用对50℃热板痛觉反响正在lO~30 8的小鼠 100只,随机分为10组,每组10只。按外2剂量腹 腔打针给药(阴性比照赐与l%吐温80心理盐水溶 液),给药前及给药后15,30,60,90 rain测定痛反响 埋伏期,按下式盘算推算痛阈抬高百分率:痛阈抬高百分 率=(给药后均匀痛阈值一给药前均匀痛阈值)/给药 前均匀痛阈值×100%[sl。 2.4解痉尝试 SW-CJ?1C超净事业台(姑苏仪器厂),BL一410 生物性能尝试体系(成都泰盟科技有限公司),YLS. 6A智能热板仪(山东省医学科学钻研院修造站), 5701水套式CO:提拔箱(美邦Thermo Forma公 司),ELXS00酶标仪(美邦Bio-Tek公司)。 2 取兔回肠一段,置盛有冷台氏液的平皿中,分别 肠系膜,用台氏液冲洗清洁,将肠管剪滋长2—2.5 cm小段。小段肠管两头穿线结扎,一端系于通气钩 上,放入恒温台氏液中,另一端贯穿BL-410生物机 能尝试体系。调剂台氏浴槽内肠肌张力,参观寻常 肠肌行径。待自立行径安宁后,记载一段寻常舒缩 弧线,然后每段肠管按A、B、C、D按序举行尝试。 每次加药液前均用台氏液冲洗肠肌3次,待舒缩恢 尝试办法 使用SPSS 11.5举行One—Way ANOVA查验及 2.1统计学惩罚 万方数据 、U22 王梦月等:自芷中四种线型呋喃香豆素类因素药理影响钻研 复至用药前水准后再加下组试验药液,记载舒缩活 动弧线 g/L的 MTr,不断提拔4 h,贴壁细胞倾去提拔基后每孔加 mL,参观并记载舒缩弧线%异欧前胡素心理盐水溶液0.2。 0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 入150止DMSO,轻轻震摇;悬浮细胞每孔到场50 止的三联液(10%SDS-5%异丁醇旬.1%盐酸),37 ℃提拔箱中止宿。用酶标仪检测各孔570 nln吸光 参观后用台氏液冲洗。 B:到场100斗g/mL的乙酰胆碱液0.4 mL,当 肠肌紧缩明显时到场0.5%异欧前胡素心理盐水溶 液O.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mL。参观后用台氏 液冲洗。 C:到场100 mg/mL的氯化钡液O.2 mL,待紧缩 明显时到场0.5%异欧前胡素心理盐水溶液0.2, 0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mL。 度(A)值,并按下式盘算推算禁止率:禁止率=(比照组 A值一尝试组A值)/比照组A值×100%[71。 3 3.1 尝试结果 镇痛尝试 结果睹外l。四种香豆素均明显节减醋酸所致 3.1.1醋酸扭体法 小鼠的扭体次数。异欧前胡素、欧前胡素还能明白 延迟小鼠扭体的呈现,而水合氧化前胡素、白当归素 则无明白影响。4种呋喃香豆素类因素中欧前胡素 D:th肠管,不同取欧前胡素、白当归素、水合氧 化前胡素按上述按序举行尝试。 2.5抗肿瘤尝试 取对数孕育期细胞消化,计数,5 000个每孔铺 于96孔板,正在37℃、含5%CO:的提拔箱提拔24 外1 h 的影响最强,75 mg/kg的镇痛强度超出40 mg/kg的 颅痛定。手机购彩 后,到场药物(DMSO融化),每个药物浓度设3个平 四种呋喃香豆素对醋酸所致小鼠疾苦的影响 Effect On Table 1 rats'pain caused by acetic acid 注:与比照组比拟,‘P<0.05,‘’P<0.01。Note:‘P<0.05,一P<O.01ⅦNS group. 3.1.2热板法 胡素的影响明白强于异欧前胡素。白当归素、水合 氧化前胡素无明白影响。 结果睹外2。异欧前胡素及欧前胡素均有明显 的镇痛影响,能明白禁止热板法所致小鼠疾苦,欧前 外2四种呋喃香豆素对热板致小鼠疾苦反响的影响 Table 2 Effect On rats’pain caused by hot board 心理盐水 颅痛定 一 20.5±3.4 21.4±2.9 21.7 4-4.2 22.0土5.1 24.3±6.9 23.8土5.-/ 5.9 7.3 91.6 18.5 84.6 16.1 58.0 40 37.4±17.6‘41.0±8.1。39.5±12.5‘33.8±16.0‘74.8 万方数据 488 自然产品钻研与开采 V01.22 异欧前胡素 25 75 22.6±6.3 21.4±4.0 19.0±3.I 19.0±3.3 20.8±4.2 20.0±2.5 21.8±4.0 21.9±3.0 25.0±5.9 26.8,4-10.5 32.2±14.4 31.2±12.8 32.5±14.2 10.6 67.3 18.6 78.0 67.4 99.5 25.0 38.5 11.0 33.3 42.5 50.5 77.4 103.2 30.3 32.5 22.5 31.1 38.1 51.9 83.2 84.7 20.7 25.0 23.9 28.8 35.8±10.6‘38.1±11.6’32.2.4-13.1’ 31.2±4.6’ 欧前胡素 25 75 31.8±8.7’33.7±12.3’’34.8土14.9‘‘64.2 33.2±6.8’+37.9±9.2’’38.6±14.1。’35.1±15.6‘‘74.7 30.4±11.6 28.0±11.2 23.9±3.8 25.6±12.0 26.0-e-6.4 27.7±13.9 24.2±5.2 29.2-I-12.3 27.1±13.1 26.5±13.8 26.7±11.7 28.7±15.8 group. 白当归素 25 75 25.1±6.5 25.0±5.7 27.0±7.4 28.2 4-9.1 46.2 40.0 9.6 16.9 水合氧化前胡素 25 75 注:与比照组比拟,‘P<O.05,‘‘P<O.仇。Note:‘P<0.05,‘‘P<O.01ⅦNS 3.2解痉尝试 结果:4种香豆素对寻常兔肠滑腻肌舒缩均无 明白影响;均不行明显缓解乙酰胆碱惹起的兔肠平 滑肌痉挛;异欧前胡素、欧前胡素、水合氧化前胡素 液能明白缓解氯化钡惹起的肠管滑腻肌痉挛,白当 归素无明白影响。 3.3抗肿瘤尝试 结果睹外3。异欧前胡素、水合氧化前胡素均 有抗肿瘤影响,对HL-60、HELA、P388、A549等4种 细胞株的孕育均有明显禁止影响,并呈明白的量效 相干。而欧前胡素、白当归素未参观到明白影响。 外3四种呋喃香豆素对肿瘤细胞株的禁止影响(I/,=3) Table 3 The inhibition ratio of 4 furoeoumafim Oil 6 tumoI'cells 异欧前胡素 ItL-60 HELA P388 ^S49 BEI.7402 HLl210 97.7 89.3 80.3 81.3 67.2 68.9 63.7 54.6 77.3 73.7 62.0 69.4 71.4 55.1 38.4 88.4 73.6 ’34.2 68.7 92.5 71.3 96.7 78.2 80.3 86.2 92.5 40.3 78.4 44.9 25.3 23.1 26.6 47.8 38.2 21.8 4.8 22.9 90.6 9.2 8.1 56.3 76.3 86.1 88.4 64.3 66.1 77.8 71.5 15.4 63.2 33.4 0 8.2 13.1 30.1 44.2 40.7 27.0 43.3 28.8 35.7 17.9 33.9 35.6 55.7 44.2 45.3 44.2 32.3 50.2 7.8 0 20.7 5.2 0 18.4 5.6 0 0 0 5.1 O 23.3 0 13.3 50.2 12.3 59.7 7.2 22.7 14.4 14.7 0 5.3 22.5 O O 6.5 15.8 0 14.4 0 7.8 lO.1 8.7 0.7 2.8 17.2 34.6 0 一 1.42 1.0l 1.36 0.94 13.03 7.59 13.75 49.70 18.44 20.95 17.39 14.59 15.24 29.17 89.06 7.62 35.23 73.75 9.15 1.59 2.16 3.64 + + + + - + 欧前胡素 m.60 HEIA P388 A549 BEL_7402 l-ILl210 - I . - . . 白当归素 HL60 HELA P388 A549 BEL.7402 HLl210 . . . + - . 水合氧化前胡素 H嘲 HEIA P388 ^549 + + + + 万方数据 VoL 22 王梦月等:白芷中四种线型呋哺香豆素类因素药理影响钻研489 注:+有活性;一无活性。Note:+positive;-Negative. 4筹议 白芷及其某些复方制剂正在临床上平凡用于头 痛、牙痛、三叉神经痛等众种疾苦的诊疗,疗效明显, 但目前白芷镇痛的有用因素尚不显着。本尝试初度 出现白芷中的欧前胡素、异欧前胡素具有明白的镇 痛影响,除能直接抗拒由热、醋酸等物理、化学刺激 惹起的疾苦外,还能缓解滑腻肌痉挛,是白芷镇痛的 活性因素。其它,本尝试还出现自芷中的异欧前胡 素、水合氧化前胡素具有明白抗肿瘤影响。上述研 究为白芷的临床使用供给了科学按照。 目前中邦药典仅规则白芷中欧前胡素的含量, 咱们出现异欧前胡素、水合氧化前胡素等因素亦具 有明白的镇痛、解痉活性。文献也报道异欧前胡素 参考文献 1 Wang MY(王梦月),Jia MR(贾敏如),Ma YY(马逾英), 以面.Pharmacological effect of the total couma_riiis in radix Angelicae dahuricae.Ii.ShiZhen Med Mater Med肠(时珍邦 医邦药),2005,16:954-956. 2 Qin XH(秦旭华),u zL(李祖伦),ghu GF(朱果夫),钟 a/.Study on the pharmacodynamics of total coumarin of Ra? diz angelicae dahuricae in treating migraine.1&chuan Trad Chin Med(四川中医),2008,26(6):4击. 3 Okuyama T,Takata M,Nishino H,et以.Studies Oil the anti- tumor-promoting activity of naturally occurring substances II. Inhibition of lism by tulnor promtoter-enhanced phospholipid metabo- umbelli,fel'oug materials.Chem Pharm Bu//,1990,38 (4):1084. 4 具明白解痉影响及光敏活性【3J。联合白芷的效用, 创议将异欧前胡素、水合氧化前胡素也动作白芷质 量左右目标。 ’ Wang MY(王梦月),Jia MR(贾敏如).Research OIl progress chemical constituents of Radix angel记ae dahurieae.J 吼讧Med Mat明(中药材),2002,25:446—449. 5 Zhang 本文所采用的4种香豆素为白芷的苛重因素, 组织均为线型呋喃香豆素,母核雷同,仅庖代基及取 代地方分别。但它们正在镇痛、缓解滑腻肌痉挛、细胞 毒等方面的影响均有明白分别,提示庖代基的类型 及庖代地方对线型呋喃香豆素的生物活性具有明显 影响。白芷中线型呋哺香豆素类因素的构效相干值 得进一步钻研。 7 , MF(张明发),Shen YQ(沈雅琴),Tang CK(汤臣 and analgesic actions of berberine. 康).Anti?inflammatory Nat Prod 53. 6 Res眈”(自然产品钻研与开采),1990,2(1):49? Chert Q(陈奇),Shen YJ(沈映君),Sun XH(孙学蕙),et a1. |I℃hls PII衄衄砌昭cal Exp谢I鲫Ic(中药药理尝试).Guiyang: Guizhou People’8 Publishing House.1988.105?107. Xu st(徐叔云),Bian aL(卞如濂),Chert x(陈修).Phar- maeological Experiment Methodology,3rd ed(药理尝试办法 伸谢抗肿瘤活性测试由邦度新药筛选中央完 成;乙醇提取事业由四川省公民病院药学部结束;成 都中医药大学黄邦钧熏陶、唐声武熏陶、蒋桂华副教 授供给了需要助助,正在此一并流露感动。 8 学).Beijing:People’8 1784-1786. Medical Publishing House,2002. Wang川(江纪武),Xieo Constituents in Qx(肖庆祥).Handbook of Active Phytomedicine(植物药有用因素离册).Bei- Medical jhag:People’8 Publishing House,1986.603. 万方数据

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