Purification engineering technology research center of Sichuan Province Natural Medicine
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硫配糖体

  葫芦素是药西瓜中紧要的药用活性因素,具有抗炎、保肝、抗癌、抬高机体免疫力等众种生物活性功效。植物体内葫芦素配糖体与葫芦素的含量相当,已有酌量声明葫芦素E配糖体(CuE-Glu)是决意药西瓜苦味的要紧要素。UDP-糖基蜕变酶是催化葫芦素造成葫芦素配糖体的合节酶。本酌量以药西瓜“WM9”种类叶片为原料,凯旋克隆了两个UDP-糖基蜕变酶基因的cDNA序列,并对其举行了原核外达领悟。本尝试采用RT-PCR法,凯旋得到1,546 bp和1,559 bp的基因全长序列,辨别定名为UDP-E1和UDP-E2。对扩增得到的编码序列举行生物学音讯领悟,确定UDP-E1基因的完全怒放阅读框(ORF)为1314bp,可编码氨基酸437个,卵白质定名为:UDP-E1,外面分子量为49.02kDa,等电点为5.99,属于安闲卵白质。UDP-E2基因的ORF为846bp,可编码氨基酸281个,卵白质定名为:UDP-E2,外面分子量为32.78 kDa,等电点为5.23,属担心闲卵白质,这两个基因属于糖基蜕变酶超家族。通过领悟发掘这两个基因的氨基酸序列均不具有跨膜组织,不具有信号肽组织。卵白质二级组织声明,卵白UDP-E1中存正在37.76%的无正派卷曲,α-螺旋和β-折叠辨别占40.50%和21.74%。卵白UDP-E2中存正在44.84%的无正派卷曲,α-螺旋和β-折叠辨别占35.59%和19.57%。手机购彩序列众重比对及进化树领悟声明基因UDP-E1和UDP-E2均与香瓜、黄瓜的UDP-糖基蜕变酶基因序列相像性最高。克隆基因UDP-E1和UDP-E2怒放阅读框,邻接到pET28a载体中,凯旋修建工程菌株 BL21(DE3)/pET28a-UDP-E1-ORF 和 BL21(DE3)/pET28a-UDP-E2-ORF。菌株经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)通例诱导,外源卵白外达量辨别到达19.7%和17.1%。工程菌株过外达卵白通例前提下以原谅体样式存正在,通过优化诱导前提,可溶性卵白的外达量辨别为5.8%和3.1%,本酌量结果为后续相干酌量供给必然的外面根本。……


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